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          補體介導法細胞毒實驗

          發(fā)布時間: 2021-11-01  點擊次數(shù): 1130次
          材料與儀器

          C57BL/6J小鼠
          Hank’s液 單克隆抗體 補體 伊紅-Y染液
          眼科剪 眼科鑷 平皿 不銹鋼網 試管 吸量管 尖吸管 載玻片 蓋玻片 顯微鏡

          實驗步驟


          一、實驗方法
           
          1.  小鼠胸腺細胞懸液的制備:將4~6周齡小鼠采用頸椎脫臼法處死,取出胸腺放入已加入約4 ml冷Hank&rsquo;s液的平皿中,在100目的不銹鋼網上研磨后,過篩,放入試管,離心1 000 rpm,5分鐘,用Hank&rsquo;s液洗兩次。將沉淀的細胞重懸于Hank&rsquo;s液中,配成1&times;107/ml細胞懸液。
           
          2.  取試管3支,標明順序,依據下表依次加入1&times;107/ml胸腺細胞懸液、抗小鼠Thy-1的單克隆抗體(最適稀釋度)及Hank&rsquo;s液,放入37℃水浴30分鐘。
           
          3.  取出后每管加入1%伊紅-Y染液1滴,混勻,室溫放置2分鐘。
           
          4.  重新混勻后分別在一張載玻片上滴片,加蓋玻片鏡檢。先在低倍鏡下觀察,再用高倍鏡觀察,比較3管中細胞死活情況。
           
          二、實驗結果
           
          死細胞呈紅色,無光澤且腫脹變大;活細胞不著色、有光澤且形態(tài)正常。
           
          高倍鏡下計數(shù)200個細胞并計算其中死細胞的百分數(shù)。計算公式如下:死細胞百分數(shù)= EQ EQ \F(實驗管死細胞數(shù)%-對照管死細胞數(shù)%,100%-對照管死細胞數(shù)%)



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