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          含甲酰胺的測序膠

          發(fā)布時(shí)間: 2021-12-15  點(diǎn)擊次數(shù): 1000次

          原理

          聚丙烯酰胺凝膠加人甲酰胺可以使造成條帶壓縮的測序產(chǎn)物的二級結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定。

          材料與儀器

          DNA
          甲酰胺 甲醇 乙醇 TEMED SDS
          電泳儀

          步驟

          1.  按基本方案步驟1~5組裝凝膠平板夾層。

           
          2.  按所需濃度配制甲酰胺凝膠溶液,加熱輕輕挽拌使之溶解,冷卻至30℃以下。

          3.  加入0.15 ml TEMED及1 ml 10%過硫酸銨,馬上灌膠于凝膠平板夾層,觀察聚合情況。

          4.  在45~70 W 恒功率下電泳。
           
          5.  按基本方案步驟19~33進(jìn)行干膠及處理,但步驟18在5%乙酸 / 20%甲醇固定液中固定凝膠15 min。


          同實(shí)驗(yàn)其他方法

          變性凝膠電泳實(shí)驗(yàn)

          1.  制作每塊凝膠時(shí),首先要用肥皂及水小心嚴(yán)格地清洗兩塊30 cm&times;40 cm的前后玻璃平板,用去離子水沖洗后晾干,用噴射洗瓶噴10%乙酵或異丙醇使平板濕海。 2.  然后用Kimwi

          電解質(zhì)梯度測序膠

          1.  按基本方案步驟1~22灌制凝膠及進(jìn)行預(yù)電泳,但上槽緩沖液為0.5×TBE,下槽為1×TBE。 2.  按基本方案步驟23~26步準(zhǔn)備樣品及加樣。   3.

          緩沖液梯度測序膠

          1.  按基本方案步驟1~5組裝凝膠平板夾層。   2.  在2個(gè)100 ml 燒杯中,配制緩沖液梯度凝膠溶液:50 ml 用0.5×TBE配制,25 ml 用2.5×TBE配制

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