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          PCR 產物純化

          發(fā)布時間: 2023-04-21  點擊次數: 1008次

          材料與儀器

          TE 或去離子水 PCR 產物
          離心機和轉子 PCR 濾 件 微量離心管

          步驟

          一、材料

          1. 緩沖液和溶液

          TE(lOmmol/L Tris-HCl,lmmol/L EDTA,pH7.5) 或去離子水

          2. 核酸和寡核苷酸

          待測序的 PCR 產物

          3. 離心機和轉子

          帶有固定傾角轉子的小型離心機,如 Eppemlorf5415C

          4. 特殊設備

          AmiconMicrocon-PCR 濾件(Millipore) 或者相當的產品,微董離心管或接收管

          二、方法

          1. 對每一個待純化的 PCR 產物,都在接收管中放置一個濾件,濾件的儲液面向上

          儲液池中加入 400ul 去離子水或 TE,注意加樣時不要觸及膜。加入 100ulPCR 產物,避免帶進礦物油。如果 PCR 產物不足 100ul, 用去離子水或 TE 補足,蓋上蓋子。

          2. 將 1 中所得組合體用帶有固定傾角轉子的離心機,l000 g 離心 15 min(例如,Eppendorf5415C 離心機上 3300r/min)。注意蓋子和管的結合部朝向轉子的中央。

          3. 移去濾件,將其放入一干凈的收集管中,有膜面朝上(如果愿意,濾件可以一直

          存到樣品分析結束)。在濾件上小心地加 20ul 去離子水或 TE,注意不要觸及膜,然后將濾件反轉過來,放回到干凈的收集管中,使帶有液體的一面朝下。

          4.1000 g 離心 2 min, 收集純化的片段。


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